CROMATOGRAFIA
La cromatografía es uno de los principales métodos para la separación de especies químicas estrechamente relacionadas en mezclas complejas. La cromatografía es un método físico de separación basado en la distribución de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra móvil.
En todas las separaciones cromatográficas la muestra se disuelve en una fase móvil, que puede ser un gas un líquido o un fluido supercrítico. Esta fase móvil se hace pasar a través de una fase estacionaria inmiscible, la cual se mantienen fija en una columna o sobre una superficie sólida. Las fases se eligen de tal forma que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase móvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son retenidos con más fuerza por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo; por el contrario los componentes que unen débilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas discriminadas que pueden analizarse cualitativa y/o cuantitativamente.
Principios de cromatografía
La cromatografía es uno de los principales métodos para la separación de especies químicas estrechamente relacionadas en mezclas complejas. La cromatografía es un método físico de separación basado en la distribución de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra móvil.
En todas las separaciones cromatográficas la muestra se disuelve en una fase móvil, que puede ser un gas un líquido o un fluido supercrítico. Esta fase móvil se hace pasar a través de una fase estacionaria inmiscible, la cual se mantienen fija en una columna o sobre una superficie sólida. Las fases se eligen de tal forma que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase móvil y la fase estacionaria.
Tipos de cromatografía
La cromatografía es un método físico que se utiliza para separar e identificar compuestos. El fundamento de esta técnica consiste en que cualquier sustancia, al ser disuelta en dos disolventes distintos no miscibles, se reparte entre ambos atendiendo a su solubilidad.
- Cromatografía de reparto. La fase estacionaria suele ser mantenida fija mediante un soporte inerte poroso (papel o celulosa). La fase móvil suele ser una mezcla de disolventes medianamente miscibles con el agua. Cuanto más soluble en agua sea la sustancia a cromatografiar, más retenida y retrasada quedará en el desarrollo cromatográfico.
- Cromatografía de adsorción. La fase estacionaria retiene con más o menos poder a la sustancias a cromatografiar por un fenómeno de adsorción en superficie. Para ello se utiliza alúmina, gel de sílice, etc. La cromatografía de afinidad es un tipo de cromatografía de adsorción en la que la fase estacionaria tiene afinidad biológica por la sustancia que se quiere separar. Se utilizan así parejas antígeno-anticuerpo, enzima-inhibidor, etc. En la cromatografía de intercambio iónico, la fase estacionaria retiene a las sustancias por su carga iónica. Las sustancias con carga opuesta a la de la resina quedarán retenidas en la fase estacionaria, mientras que las de la misma carga que la resina serán arrastradas por la fase móvil.
- Cromatografía en capa fina: la fase estacionaria se extiende sobre una placa
- Cromatografía en columna: la fase estacionaria se empaqueta en una columna.
